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可裂解自组装标签助力中大型医用多肽的重组生产

2016/8/16 10:01:49   来源:   网址:www.xcxpj.com   点击:

    多肽常被应用于疾病治疗中,但是中大型多肽(30-100个氨基酸)的重组生产和化学合成却依然困难重重。早在2011年,清华大学化学工程系的林章凛教授实验室就在《Microbial Cell Factories》上发文《Active protein aggregates induced by terminally attached self-assembling peptide ELK16 in Escherichia coli》,首次报道了在大肠杆菌中,将离子自组装多肽ELK16LELELKLK2附连到模型蛋白质的羧基端,能够有效诱导胞浆包涵体或活性酶聚集体的形成。

    研究人员主要构建了两个质粒:PET-P-Intein-ELK16(基于2011年研究中的PET30a-LipA-I-ELK16)和PET-Trx-P-Intein-ELK16,前者用于表达融合蛋白(PET30a-LipA-I-ELK16),后者用于表达蛋白Trx-peptide -intein-ELK16、提高不同N端蛋白的表达和增加疏水性肽的溶解度。融合蛋白表达后,经DTT诱导内含肽介导裂解,可溶性肽被直接释放到上清液中,而不溶性肽则可以被重新折叠,并通过反向高效液相色谱法纯化。此外,靶多肽N-末端上游的硫氧还蛋白标签(Trx标签)也可通过肠激酶切割位点被切除,得到最终的靶肽。在实验室规模下,多肽的最终产率在0.11.8ug/mg湿细胞重。

    研究人员提到,这项研究可为化学合成或普通重组生产困难和昂贵的多肽提供一种快速和有效地生产途径,这种方法尤其适合中大型多肽、可被降解多肽及对宿主有毒性的多肽的生产。此外,这种方法还可大大减少下游加工的成本和时间。因此可被应用于工业制造和实验室。